Manejo del autoclave, desinfeccion y esterilizacion

MANEJO DEL AUTOCLAVE, DESINFECCIÓN Y ESTERILIZACIÓN DEL LABORATORIO

 La esterilización es un proceso esencial para el funcionamiento de un hospital, en el cual se deben utilizar todos los instrumentos quirúrgicos, implantes y muchos otros dispositivos absolutamente esterilizados. La desecación y la congelación eliminan muchas especies de bacterias, pero otras simplemente permanecen enestado vegetativo. El calor seco o húmedo elimina todas las bacterias combinando adecuadamente factorescomo la temperatura a la que se someten y el tiempo de exposición. Se puede esterilizar por calor seco enestufas a más de 160 °C durante media hora, o por calor húmedo en autoclaves a 120 °C durante 20 minutosy a presión superior a la atmosférica. La ebullición a 100 °C no elimina todos los gérmenes patógenos (entrelos que no sólo están incluidas las bacterias sino también virus y levaduras). Otro medio habitual deesterilización, utilizado para objetos no resistentes al calor, son los medios químicos: el ácido fénico, iniciador de la era de la antisepsia (Fenol), el ácido cianhídrico (Cianuro de hidrógeno), el óxido de etileno,la clorhexidina, los derivados mercuriales, los derivados del yodo (especialmente la povidona yodada) ymuchas otras sustancias. El alcohol etílico no produce esterilización completa. Otro medio de esterilizaciónactual son las radiaciones ionizantes (beta, gamma).La esterilización implica la destrucción, de todos los organismos incluyendo esporas, y la desinfección suponela destrucción de los microrganismos vegetativos que pueden causar enfermedades, pero la desinfección nomata necesariamente esporas.Los métodos más usados corrientemente en los laboratorios microbiológicos son:

 Calor rojo (flameado).

Calor seco (aire caliente).

Vapor a presión (calor húmedo)

Autoclave.

Una buena esterilización por autoclave depende de la eliminación de todo el aire de la cámara y la carga, delos materiales que van a esterilizarse deben colocarse sin apretarse. Los artículos limpios pueden ponerse encestillos de alambre, pero el material contaminado debe estar en un recipiente de fondo sólido en una alturano mayor a 8 cm. Deben dejarse grandes espacios de aire alrededor de cada recipiente y ninguno debe estar cerrado. Existen dos tipos de autoclave:

El tipo olla de presión.

El de desplazamiento por la gravedad.Por razones practicas sólo trataremos el tipo olla de presión ya que es el que tenemos en el laboratorio.El tipo olla de presión es el más común, es un aparato para agua hirviendo a presión . Tiene una cámaravertical de metal provista de una tapa metálica fuerte que se aprieta y cierra herméticamente mediante un arode goma. Se disponen en la tapa una espita para la salida del aire y el vapor, un indicador de presión y unaválvula de seguridad. El agua del fondo del autoclave se calienta mediante mecheros de gas exteriores, uncalentador eléctrico de inmersión o un serpentín de vapor.

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DESINFECCIÓN.

Para esto pueden usarse una gran variedad de sustancias químicas y todas ellas reciben el nombre común debiocidas. Los efectos del tiempo, temperatura, pH y la naturaleza física y química del artículo que se va adesinfectar y la materia orgánica presente, no son a menudo totalmente consideradas. Los tipos dedesinfectantes son muchos, y su efectividad depende de la sensibilidad de los microorganismos, los mássensibles son las bacterias vegetativas, los hongos y los virus que contienen lípidos. Las mycobacterias y losvirus que no contienen lípidos son menos sensibles y las esporas son por lo general resistentes. En laelección de los desinfectante deben tomarse en cuenta algunas consideraciones a cerca de su toxicidad y delos efectos perjudiciales que pueden tener sobre la piel, ojos y vías respiratorias. Los desinfectantes másutilizados corrientemente en los trabajos de laboratorio son los fenoles y los hipocloritos. Los aldehídos tienenuna aplicación limitada y el alcohol y las mezclas de alcoholes son menos populares, aunque merecen mayor atención.En este cuadro se resumen las principales características de los desinfectantes, y depende del investigador cual utilizar, según le convenga.

Material Volumetrico

Material volumétrico

La mayoría están constituidos por vidrio para permitir la visualización del líquido que se desea medir. Aunque en algunos casos se utilizan de plástico transparente, ya sea por su bajo precio, o para evitar una reacción entre el líquido y el vidrio (por ejemplo cuando se mide ácido fluorhídrico). Pero debe tenerse en cuenta que, en general, tienen una precisión menor.

 Subclasificación

A fin de medir el volumen poseen unas marcas grabadas. Se puede subclasificar el material según el formato de estas marcas.

Material volumétrico graduado

En este caso el elemento posee una graduación, una serie de líneas que indican diferentes volúmenes.

Material volumétrico aforado

Posee uno o más aforos.

Hay otra subclasificación que pueden recibir algunos de estos materiales, por ejemplo las pipetas y buretas (tanto las graduadas como las aforadas), pero no las probetas.

de simple enrase/aforo

En este caso, los 0 ml corresponden al elemento vacío (en realidad, se tiene en cuenta que siempre quedan unas gotas). En este caso deberá enrasarse una sola vez.

de doble enrase/doble aforo

En este caso, existe una marca para los 0 ml. Tiene como desventajas que es necesario enrasar dos veces (una al principio, y otra al final de la medición); y que si por error seguimos vertiendo el líquido más allá de la marca podemos arruinar el trabajo hecho. Y tiene la ventaja de poder utilizarse si se rompe la punta, mientras que no llegue a la marca de 0 ml.

 Metodología de uso

Si quieres saber cómo se miden los volúmenes de la mayoría de los materiales, puedes consultar cómo enrasar. Al margen de esto, el material volumétrico debe usarse con cuidado:

• No se lo debe exponer a variaciones bruscas o amplias de temperatura. Generalmente indican el rango de temperatura en el que puede operarse.
• Tener un manejo cuidadoso, ya que son muy frágiles. Esto incluye también no apoyarla horizontalmente sobre superficies que pueden estar inclinadas, ni muy cerca de elementos de metal que puedan romperlo.

 Materiales comprendidos

• Bureta
• Matraz
  • Erlenmeyer
  • Matraz aforado
• Pipeta
• Probeta
• Material graduado (química)
• Vaso de precipitado

Centrifuga

Centrifuga

•Estos equipos se utilizan para la separación de solutos de sus solventes.

•Por ejemplo, para el análisis de sangre, por lo general es necesario separar el plasma de los otros componentes para poder ser analizado.

Tipos de centrifugas

•Centrifugas de separación de sueros o plasma de baja velocidad (Macrocentrífuga, entre 2000 y 6000 R.P.M.)

•Centrifugas para microhematocritos (Microcentrífuga, entre 10000 y 18000 R.P.M.)

•Ultracentrífuga (de 20000 a 75000 R.P.M.) para separación de proteínas.

Descripción del Equipo

Las centrífugas son equipos médicos utilizados en los laboratorios, clínicas y otros, para la separación de solutos de sus solventes. Por ejemplo en la rama de laboratorio clínico, para el análisis de sangre, por lo general es necesario separar el plasma de los otros componentes para poder ser analizado.
Existen varios tipos básicos: centrífugas de separación de sueros o plasma de baja
velocidad (Macrocentrífuga, entre 2,000 y 6,000 R.P.M. aproximadamente),
centrífugas para microhematócritos (Microcentrífuga entre 10,000 y 18,000
R.P.M. aprox.) y las ultracentrífugas (de 20,000 hasta 75,000 R.P.M.) para la
separación de proteínas. También pueden ser catalogadas basándose en otras características, como: grandes, medianas y pequeñas; o de piso, de mesa, refrigeradas, etc. De acuerdo a su rotor (araña) y a sus tubos portamuestras también pueden ser catalogadas, pues existen diversas formas y tamaños.
En la figura No. 2, se muestra una centrífuga típica, con sus partes. Las partes principales de este equipo son las siguientes:

1. Tapadera
2. Cámara o gabinete
3. Base
4. Interruptor de encendido
5. Marcador de tiempo
6. Tacómetro
7. Freno
8. Control de velocidad

• Tapadera. Impide el acceso a las muestras, mientras estas están en movimiento. En la mayoría de modelos funciona en forma automática, de modo que no pueda ser
abierta mientras la centrífuga está en funcionamiento.
• Cámara o gabinete. Es el espacio físico donde se realiza el proceso de centrifugación. Dentro de esta gira el rotor (araña).
• Base. Está construida generalmente de materiales pesados, y con sistemas de
fijación a las superficies, de modo que brinda estabilidad al equipo.
Generalmente aquí están ubicados los controles.
• Interruptor de encendido. Permite controlar el suministro de energía al
equipo, a modo de encenderlo, apagarlo, y generalmente incluye
selección de modo de operación.
• Control de Tiempo. Permite controlar el tiempo de centrifugación.
Generalmente también permite visualizar el tiempo transcurrido o
pendiente para que finalice un proceso seleccionado.
• Tacómetro. Muestra la velocidad a la que gira el rotor, es decir la velocidad
de centrifugación (en revoluciones por minuto, RPM).
• Freno. Algunas centrífugas, dependiendo del modelo, presentan este control, el cual permite ya sea hacer más rápido el proceso de paro de la centrífuga, o detenerla en situaciones de emergencia. Su función específica es determinada por el
fabricante, por tanto debe ser utilizado con precaución según las instrucciones de éste.
Otras partes no mostradas en la figura, pero importantes en la centrífuga son:
• El rotor. También conocido como araña, es la parte en la cual se colocan
los portamuestras. Para su conservación es importante seguir las instrucciones de cargado de la centrífuga.
• Portamuestras. Son una especie de recipientes donde se colocan las muestras. Su tamaño depende de la aplicación para la que esté diseñado el equipo: Banco de sangre, hematócrito, etc.
Estos componentes pueden ir variando dependiendo de la complejidad y calidad
del equipo.

Cargado de la Centrífuga
El cargar la centrífuga en una forma adecuada es muy importante para el
funcionamiento correcto de la misma, y su preservación. Un procedimiento
incorrecto de cargado, ocasiona que la centrífuga vibre durante el proceso de
centrifugación, lo que ocasiona que el rotor sufra daños que pueden llevar a su
sustitución.
Un procedimiento de cargado correcto, implica el colocar las cargas en el rotor
en forma balanceada. Las centrífugas están diseñadas para obtener un balance
cuando están en movimiento. Para esto es necesario cumplir los siguientes
requisitos:
a) Colocar las cargas de modo que las cargas que tienen la misma masa o
peso queden colocadas de forma opuesta en el rotor. Si tiene un número impar de muestras para ser cargadas, busque otra muestra de igual peso a modo de siempre formar pares opuestos de igual peso; nunca coloque un número impar de muestras dentro de la centrífuga.
Utilice la balanza para estar seguro de la igualdad de los pesos.
b) Además de tener la misma masa (peso), deben tener el mismo centro
de gravedad, es decir: no coloque tubos y recipientes como pares
contrapuestos, que tengan diferente forma, tamaño, espesor, etc.
c) Utilice la centrífuga colocando todos los accesorios en el rotor, ya que
estos equipos han sido diseñados para trabajar con estos.
d) Utilice el rotor y accesorios originales del equipo. Las piezas no
originales pueden producir un desbalance y acortamiento de la vida
útil del equipo.
e) Complemente estas recomendaciones con las instrucciones del fabricante.

"Manejo del Microscopio"

El Microscopio óptico compuesto

PARTES DE UN MICROSCOPIO ÓPTICO Sistema óptico OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo. OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta. CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación. DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador. FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador. Sistema mecánico SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo. PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación. CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular, ….. REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos. TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y micrométrico que consigue el enfoque correcto. MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esas condiciones. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparación es de bacterias. Para realizar el enfoque: Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar el micrométrico hasta obtener un enfoque fino. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión.   Empleo del objetivo de inmersión: Bajar totalmente la platina. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de x40. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede retirar la preparación de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica. Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio.